DBS 干血斑应用特集 4: 牛孢疹病毒抗体的检测
牛鼻气管炎及其诊断
牛鼻气管炎 (bovine rhinotracheitis, IBR) 是一种牛的流行性疾病，患病会引起牛的产量下降、高额的治疗费用和贸易限制，因此会在世界范围内造成巨大的经济损失。
牛孢疹病毒 BoHV-1 是传染性牛鼻气管炎 (IBR) 的病原体，而 BoHV-1 抗体则是诊断牛鼻气管炎的生物标记物。对牛进行定期的 BoHV-1 抗体监测可以在病牛患病初期进行个体识别与隔离，有效地降低牛鼻气管炎在牛群中大规模传播的风险，因此对保障畜牧业收益具有重要的价值。
干血斑: 方便的血样采集
目前 BoHV-1 抗体监测采用的是酶联免疫吸附测定 (Enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)，需要由兽医抽取牛的静脉血液，离心分离出血浆，再进行检测。静脉取血的取血量大，且过程比较复杂，需要兽医具有丰富的经验。取血过程中，动物往往会出现抵触情绪，有时甚至会受到惊吓。
干血斑 (Dried blood spots, DBS) 是一种新型的血液采集和储存方法。它将微升级末梢血采集到样品卡上，干燥后形成斑点。该方法采样过程简单方便，饲主可自行操作；侵入性小，特别适合对小型动物 / 宠物和实验动物进行血样采集。
相比于液态血，固态的干血斑具备更好的稳定性和生物安全性，可实现样品的常温运输，更可以以更温和的条件储存样品，构建生物样本库。
简单血样采集步骤
DBS 干血斑应用案例:
牛孢疹病毒抗体的检测
研究首次将 DBS 技术应用于 BoHV-1 抗体的检测中，从技术上证明了其应用可行性。BoHV-1 阳性和阴性的干血斑样本通过全自动干血斑萃取平台 DBS-MS 500 Hct 直接萃取收集，再进行 ELISA 测试，检测 BoHV-1 抗体。
与干血斑样品对应的血浆样本 (BoHV-1 阳性和阴性) 也采用相同的检测方式进行检测，用于对比干血斑样本与传统血浆样本的异同。另外，此项研究还探讨了干血斑的储存条件与时间对 BoHV-1 抗体检测结果的影响。
样本
9 个阳性干血斑样本、20 个阴性干血斑样本及对等数量的阳性和阴性血浆样本
检测目标
BoHV-1 抗体
卡片
Ahlstrom AutoCollectTM
样本运输条件
室温三天、-20°C 四个月、保存四周 (含 4 个不同条件: 4°C、室温、37°C 及一小时紫外光照后室温)
提取方法
Epitope ELISA kit 缓冲液直接提取
检测方法
ELISA、IDEXX IBR gB X3 Ab Test kit
结果
干血斑样本的检测结果与传统血浆样本结果完全一致。
另外，干血斑样本在室温下保存 3 天或在 -20°C 保存 4 个月，都能得到准确的检测结果，因此其高稳定性可以允许干血斑样本的室温运输及长期保存，特别适合用于相关疾病的大规模筛查。
从左至右的五个条件分别为室温保存 3 天的阳性干血斑、-20°C 保存 4 个月的阳性干血斑样本、阳性血浆样本、阴性干血斑样本和阴性血浆样本。抗体效价说明: >55% 认定为阳性，<45% 认定为阴性，45% – 55% 之间为怀疑样本。
参考文献:
Lechmann, J.; Gehrig, O.; Luginbühl, M.; Fraefel, C.; Gaugler, S. Fully automated dried blood spot sample handling and extraction for BoHV-1 antibody testing by ELISA. J. Virol. Methods 2022, 310, 114626.
配合干血斑加快进行生物标记物的研究，力扬推出 CAMAG 全自动干血斑萃取系统 DBS-MS 500，从自动化方向对传统干血斑技术进行的一次全面升级，可实现全自动、快速、无人值守的干血斑样品制备，并可结合质谱、PCR、NGS 测序及 ELISA 等检测技术，应用于以下领域：
健康生物标记物检测
治疗药物监测
基因组检测
感染检测
生物样本库
药物的临床前试验
食品安全
